基因敲除H9C2細胞系-人類心肌細胞系前瞻性分子研究-源井生物_風聞

胚胎大鼠心肌細胞的H9C2系是Kimes和Brandt（1976）從胚胎BD1X大鼠心臟組織衍生而來的原始克隆細胞系的亞克隆系。該細胞系顯示出骨骼肌的許多特性，其參數在抗癌藥的臨牀前測試，確定其心臟毒性，安全性以及進入後續臨牀測試階段的可能性時特別有用。因此，H9C2細胞系廣泛用於許多體外研究中，其中一些涉及CRISPR技術來介導H9C2細胞的特性。

H9C2細胞保留了一些信號轉導途徑的組成部分，這些成分對於它們分化為成熟的心肌細胞至關重要。該細胞系特別用於新的主要是抗癌藥物（例如阿黴素）的心臟毒性分析，心肌細胞損傷機理的研究以及所研究化合物對心肌細胞凋亡和壞死的毒性作用的評估。胚胎H9C2心肌細胞在體外條件下增殖良好，可以相對輕鬆地培養，適合用作CRISPR基因敲除/敲除或過表達模型，用於心臟肥大的體外研究，並支持目前與人類心肌細胞系一起用於前瞻性分子研究的工作心臟發育和疾病。

應用範圍：

1. C3G基因敲除對H9C2****心肌細胞增殖和凋亡的影響

先前的研究發現，在大鼠梗塞周圍非梗塞區域的心肌中，C3G表達顯着增加。過表達的C3G可促進心肌細胞存活並抑制細胞毒性，而降低C3G則可抑制心肌細胞存活並增加心肌細胞凋亡。使用CRISPR / Cas9系統內置的敲除C3G重組慢病毒感染H9C2心肌細胞，以研究C3G敲除對H9C2心肌細胞增殖的推測作用和機制。用上述慢病毒分別感染H9C2心肌細胞，以研究C3G（Crk SH3域結合鳥嘌呤核苷酸交換因子）敲除對H9C2心肌細胞增殖和凋亡的影響及其潛在機制。

2.利用CRISPR-Cas9基因編輯技術敲除H9c2細胞的Tudor-SN基因，抑制細胞週期阻滯和增殖

CRISPR-Cas9基因編輯技術被用於敲除大鼠心肌H9c2細胞的Tudor-SN（Tudor葡萄球菌核酸酶）基因。研究人員觀察到它對H9c2細胞週期和增殖的影響。選擇PX462質粒作為載體，使用軟件設計可以特異性識別H9c2細胞中Tudor-SN基因第二外顯子的上，下游sgRNA（單導RNA）。隨後，將這對質粒共轉化為H9c2細胞，然後選擇陽性單克隆細胞進行培養。用蛋白質印跡法鑑定敲除作用，並使用成功敲除的細胞系通過流式細胞術和CCK-8 =實驗檢測細胞週期和增殖。 Western印跡結果表明，Tudor-SN蛋白在陽性細胞中不表達，併成功敲除了Tudor-SN基因。流式細胞儀結果表明，Tudor-SN基因敲除細胞具有G1期阻滯。

CCK-8實驗的結果表明KO細胞的增殖速率減慢。本實驗成功構建了H9c2細胞的Tudor-SN基因敲除細胞系，並檢測了Tudor-SN基因敲除對細胞週期阻滯和增殖的抑制作用，為Tudor-SN基因在H9c2細胞的調控提供了研究。心肌細胞功能。便利的工具和研究基礎。

3. Dock180基因敲除抑制大鼠源性H9C2心肌細胞株的增殖並促進其凋亡

為了研究胞質分裂抑制劑1（Dock180）敲除對大鼠源H9C2心肌細胞增殖和凋亡及其機制的影響，使用CRISPR / Cas9系統設計和構建了靶向大鼠Dock180基因的單個嚮導RNA（sgRNA）。將包含在sgRNA上方的質粒包裝到慢病毒中，並選擇其敲除心肌細胞中的Dock180。結果表明，用CRISPR / Cas9 H9C2細胞敲除Dock180可以抑制增殖，並通過p-ERK1 / 2，Bcl-2和Bax促進H9C2心肌細胞凋亡。

Ubigene Biosciences，我們提供高效和100％保證的CRISPR服務，包括基因敲除/敲入和點突變細胞系。使基因組編輯更加容易是Ubigene的目標。我們的專有技術已成功應用於100多種類型的細胞系中。

CRISPR-U™是Ubigene Bioscience獨立開發的專有技術，用於基因編輯細胞系。

基因敲除切割效率不僅可以讓人具有生成人糖基化譜和建立調控記錄的能力，而且具有多種優勢，是一種特別有吸引力的重組蛋白表達系統。首先，它在穀氨酸上羧基化，在酪氨酸上硫酸化。第二，操作簡單，通過瞬時基因表達可以快速產生重組蛋白。第三，可用於穩定的重組蛋白生產。一些研究人員利用基因敲除切割效率系統產生基因編輯細胞系，對GLUL基因組位點進行靶向測序，產生產生產生EPO的穩轉細胞系，並發現重組促紅細胞生成素在人體內穩定表達的機制

源井生物根據客户需求，結合靶基因的情況進行基因穩轉敲除方案設計。

 方案1：小片段基因敲除方案，gRNA設在外顯子2兩端的內含子中，敲除外顯子編碼鹼基數為非3倍數，敲除後可造成移碼。

方案2：移碼基因敲除方案，gRNA設在外顯子上，缺失的鹼基數為非3倍數，敲除後可發生移碼突變。

方案3：大片段基因敲除方案，將整個基因的編碼序列敲除，達到大片段敲除的效果。

Reference:

Fan L, Kadura I, Krebs LE, Hatfield CC, Shaw MM, Frye CC, Improving the efficiency of CHO cell line generation using glutamine synthetase gene knockout cells.

Aga, M., Yamano, N., Kumamoto, T. et al. Construction of a gene knockout CHO cell line using a simple gene targeting method. BMC Proc 9, P2 (2015). 

Noh, S.M., Shin, S. & Lee, G.M. Comprehensive characterization of glutamine synthetase-mediatedselection for the establishment of recombinant CHO cells producing monoclonal antibodies. Sci Rep 8, 5361 (2018).

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