限度法分析方法驗證項目之我見_風聞

根據ICH Q2 分析方法驗證：正文與方法學、《中國藥典》2020年版 9101 分析方法驗證指導原則要求，限度法分析方法需要進行的驗證項目包括專屬性、檢測限、耐用性。

檢測限係指試樣中被測物能被檢測出的最低量。檢測限僅作為限度試驗指標和定性鑑別的依據，沒有定量意義。常用的方法如下：

1. 直觀法

用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。

2. 信噪比法

用於能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的被測物質最低濃度或量。一般以信噪比為3︰1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。

3. 基於響應值標準偏差和標準曲線斜率法

按照LOD=3.3δ/S公式計算。式中LOD：檢測限；δ：響應值的偏差；S：標準曲線的斜率。

δ可以通過下列方法測得：①測定空白值的標準偏差；②標準曲線的剩餘標準偏差或是截距的標準偏差。

通過以上要求可知，對於檢測限的驗證一般均是採用對照品來進行，此時忽略了樣品加標的響應情況，可能存在樣品中加入限度濃度的對照品無法檢出情況（例如回收率非常低的情況），難以證明待驗證方法的科學性，因此筆者推薦按USP **<1200>Requirements for Compendial Validation 的要求進行“可檢測性”**的驗證。

可檢測性驗證****需配製的溶液如下：

Ø 1:配製一個在限度濃度的雜質對照品溶液

Ø 2:配製一個在限度濃度的樣品加標溶液

Ø 3:配製一個（限度100%-%RSD*濃度）的樣品加標溶液

*RSD從Horwitz方程估算得出；RSD見圖1

圖1 濃度-RSD曲線

可接受****標準：

如果1≤2 且 3<2，則差異可被檢測出，否則，該方法不能勝任限度檢測。

“可檢測性”驗證比較了對照品溶液、對照品加標溶液1和對照品加標溶液2的響應值，其實是變相的比較了回收率（非定量），從而保證了限度法分析方法的科學性。

該方法在USP<233> ELEMENTAL IMPURITIES—PROCEDURES的限度法驗證中得到了應用，其驗證要求如下：

l 溶液製備方法

Ø 標準溶液：製備目標濃度下待測元素的標準溶液。

Ø 樣品加標溶液1：製備被試樣品溶液，在目標濃度下加入待測元素的對照品溶液，溶解或消化同樣品製備過程。

Ø 樣品加標溶液2：製備被試樣品溶液，加入目標元素濃度80%的待測元素的對照品溶液，溶解或消化同樣品製備過程。

Ø 無標樣品溶液：按樣品溶液製備方法進行溶解或消化。

要求：加標樣品溶液1的三次重複測量的平均值在標準溶液重複測量獲得的平均值的±15%以內。加標樣品溶液2的重複測量值的平均值應小於標準溶液的信號強度或值。【注：使用未加標樣品溶液修正每個加標溶液的所得值。】

綜上，限度法分析方法進行“可檢測性”的驗證更科學合理。