一文掌握｜OVCAR-3細胞培養&基因編輯全攻略_風聞

在卵巢癌相關研究領域，**OVCAR-3細胞**堪稱“王牌模型”。它因出色模擬臨牀化療耐藥特性，被廣泛應用於腫瘤耐藥機制解析、靶向治療策略開發、免疫逃逸現象研究及多種基因功能探索中。從藥物篩選、基因敲除，到信號通路分析與細胞命運追蹤，它幾乎覆蓋了腫瘤科研的全流程，是科研工作者常備的實驗“利器”。如果你還沒有開始使用OVCAR-3細胞，可能已經與一條通向研究前沿的捷徑擦肩而過！今天，小源將帶你全面“解鎖” OVCAR-3的使用指南：分享實用的培養心得與高效的基因編輯技巧，助你在科研道路上效率倍增，輕鬆應對各類核心實驗！

細胞信息

**細胞名稱：**OVCAR-3（人卵巢癌細胞）

**細胞形態：**上皮樣，貼壁細胞

**細胞培養條件：**80%RPMI-1640+20%FBS+0.01mg/mL胰島素

**氣相：**空氣，95%；二氧化碳，5%

**温度：**37℃

**換液頻次：**2-3天/次

**傳代比例：**1:2-1:3

細胞生長正常圖片：細胞呈不規則上皮樣，多為多邊形或梭形，會呈現"鋪路石樣"排列

細胞生長狀態差圖片：細胞形態異常，如細胞體積變大，扁平化（如下圖紅框框起來處），細胞可能變得不規則，失去典型的鋪路石樣外觀，出現空泡化等。

細胞復甦

1) 準備：取7mL完全培養基於離心管中備用

2) 解凍：將細胞從乾冰裏取出，用鑷子夾住蓋子放入 37℃水浴中快速晃動（注意：水不能沒過蓋子），使其在1分鐘左右完全融化，直至冰塊融化至綠豆大小，停止水浴

3) 離心：將解凍後的細胞懸液轉移至離心管中，1100rpm條件下離心4分鐘，棄去上清液

4) 重懸與接種：用完全培養基重懸細胞，接種於合適大小的培養皿/瓶中

5) 培養：將培養皿/瓶置於37℃培養箱中培養，24小時後觀察細胞狀態及貼壁情況

細胞傳代（以T25瓶為例）

1) 當細胞匯合度達到80%時可進行傳代，傳代時在超淨台內棄去培養瓶裏的培養液，加入5mLPBS洗滌細胞1-2次。

2) 加入1mL胰酶，輕輕晃動瓶子並使胰酶完全浸過細胞，將培養瓶放入培養箱孵育 3-4分鐘，待在顯微鏡下觀察到大部分細胞變圓變亮，輕輕晃動培養瓶兩側有大部分細胞脱落時，立即終止消化。

3) 加入2倍胰酶體積即2mL完全培養基終止消化，然後轉移至15mL離心管中。

4) 1100 rpm 室温離心 4 分鐘，離心結束，棄去上清，加入完全培養基重懸細胞。

5) 細胞按照1:2-1:4比例傳代，傳代第二天觀察細胞狀態。

細胞凍存

1) 收集細胞：按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中。

2) 離心：1100rpm條件下離心4分鐘，去掉上清。

3) 重懸與凍存：用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10^6個細胞/mL分配到凍存管中，標註好名稱、代數、日期等信息。

4) 降温與儲存：將凍存管置於程序降温盒中，-80℃冰箱中過夜後轉入液氮罐內保存。

OVCAR-3細胞培養****注意事項

1.在培養OVCAR-3細胞時，血清的濃度需精確控制在20%，並需額外補充胰島素至終濃度0.01 mg/mL，以滿足細胞生長需求。

2.胰酶消化過程中需密切關注時間，儘量使細胞解離為單個狀態。操作時應避免劇烈吹打，採用輕柔方式處理，以減少機械損傷。

3.建議傳代時維持適當的接種密度，每次分瓶比例控制在1:2至1:3之間。待細胞匯合度達到80%至90%時進行傳代，有助於維持其良好的生長狀態。

4.培養過程中推薦使用品質優良的胎牛血清，以提升細胞活性和實驗穩定性。

OVCAR-3細胞轉染時注意事項

1.轉染前應確保細胞狀態良好，並處於對數生長期，此階段細胞活躍、分裂迅速，能顯著提升轉染效率。建議細胞密度控制在70%~80%之間。

2.消化細胞時需掌握好酶消化時長，避免因處理過度造成細胞損傷。

3.操作過程中應將細胞充分打散為單細胞懸液，儘量避免出現細胞聚團現象。

4.實驗用細胞的存活率應達到80%以上，以保證實驗可靠性。

5.若採用電轉法進行轉染，需嚴格控制所用細胞數量，並於電轉結束後及時將細胞接種於合適類型的培養板中。

6.電轉後細胞應具備良好的貼壁能力，貼壁率不低於70%，以確保後續實驗順利進行。

7.使用電轉技術時，實驗總時長需嚴格控制，避免電轉過程時間過長導致細胞活力下降。

8.電轉完成24小時內應及時更換為含高品質胎牛血清的完整培養基，以促進細胞恢復和生長。

9.使用慢病毒載體轉染時，應將感染前的細胞密度控制在30%~40%之間，避免過度融合影響感染效率。

10.病毒法正式實驗前建議開展預實驗，以確定最合適的MOI，同時在感染階段加入Polybrene助染劑以提高轉染效率。

11.對於各類轉染試劑，在使用前務必徹底混勻，確保成分分佈均勻，以保證實驗的一致性和重複性。

OVCAR-3鋪單克隆實驗注意事項

1. 確保鋪克隆實驗前細胞狀態正常，老化細胞少，建議控制細胞匯合度在70%左右

2. 鋪克隆時細胞活率≥80%

3. 可先進行預實驗找到合適的鋪克隆梯度，避免單克隆佔比太低

4. 細胞接種96孔板時需確保細胞分佈均勻

5. 稀釋細胞計數後結果最好落在1*10^6-2*10^6之間

電轉圖: