特色服務—多糖藥物結構確證研究_風聞

多糖類藥物結構確證是藥物研發和質量控制的核心環節，其研究內容涵蓋從一級結構到高級構象的全面解析。但因其結構複雜，且多為多組分物質，結構確證難度極大，同時也成為CDE發補的重災區，發補內容示例如下：

（1）XXX主要成分為XXX，並含有一定量的蛋白質、脂肪、植酸、澱粉等，請採用適宜的方法（如GC-MS）對主要成分XXX的單糖組成及其連接方式進行確證，並採用UV、IR、拉曼光譜、色譜、質譜、電泳、NMR和熱分析等適宜的手段對各成分進行結構確證，同時與參比製劑進行對比研究。

（2）請對本品分子量分佈進行研究（請提供重均分子量和數均分子量具體檢測數據及檢測圖譜，並計算多分散係數），並與參比製劑進行對比研究。

（3）請對本品聚合度進行研究，並與參比製劑進行對比研究。

（4）請明確本品XXX含量，並與參比製劑進行對比研究。

（5）建議進行結晶度測定，可使用X射線衍射手段。

多糖藥物結構確證研究內容

一、一級結構解析1. 單糖組成分析

· 酸水解：三氟乙酸（TFA）或鹽酸完全水解多糖為單糖。

· 色譜技術：

o HPLC/GC-MS：定量各單糖種類及摩爾比（甘露醇為內標）。

o 毛細管電泳（CE）：高分辨率分離單糖。

2. 分子量與分佈測定

· 凝膠滲透色譜（GPC）：基於分子尺寸排阻原理，需已知分子量標準品校準。

· 多角度激光光散射（MALLS）：絕對分子量測定，無需標準品，可聯用GPC。

· 輔助方法：粘度法、動態光散射（DLS）。

3. 糖苷鍵連接方式與位置

· 甲基化分析：

o 全甲基化後水解，GC-MS分析甲基化單糖，推斷連接位點（如Cucanu-Kerek法）。

o 紅外光譜驗證（3500 cm⁻¹無-OH峯表明甲基化完全）。

· 高碘酸氧化與Smith降解：選擇性氧化鄰二醇鍵，確定直鏈/支鏈結構。

· 核磁共振（NMR）：

o 一維（¹H-NMR、¹³C-NMR）：異頭碳信號（δ 90–112 ppm）判斷糖殘基數及構型（α/β）。

o 二維（HSQC、HMBC）：解析糖苷鍵連接序列及異頭碳構型。

4. 糖環形式與取代基分析

· 紅外光譜（IR）：

o 844 cm⁻¹（α-構型）、891 cm⁻¹（β-構型）。

o 1240 cm⁻¹（硫酸基）、1650 cm⁻¹（乙酰基）等特徵峯。

· **化學修飾分析：**如乙酰化、硫酸化位點鑑定。

二**、高級結構研究****1. 二級結構與分子構象**

· **圓二色譜（CD）：**檢測螺旋結構（如多糖的右手螺旋）。

· **原子力顯微鏡（AFM）：**直接觀察分子形態、分支及聚集狀態。

· **X射線晶體衍射：**適用於可結晶多糖的三維結構解析。

2. 序列與拓撲結構

· **酶解/化學降解：**將多糖片段化，質譜（MS/MS）或NMR分析小片段序列。

· 質譜技術：

o 串級質譜（MSⁿ）：基於同位素輪廓指紋比對，解析拓撲結構。

o 納米孔測序與AI輔助：新興的快速微量分析手段。

山東大學淄博生物醫藥研究院擁有600M核磁共振波譜儀、高分辨質譜儀、液質聯用儀、多角度激光散射儀等多糖結構確證的關鍵儀器，依託山東大學在糖藥物領域強大技術支撐，先後承接肝素、環糊精、纖維素、澱粉類及合成多糖如阿卡波糖、磺達肝癸鈉等結構確證研究項目近20個品種，在多糖結構確證領域積累了豐富的經驗。

近期，我院針對多磺酸粘多糖成立了專門攻關小組，結合前期項目經驗對該項目結構確證進行了重點攻關，目前已突破關鍵技術，完成了核磁一維譜和二維譜的測試解析、酶解後二糖分析、寡糖分析、磺酸化程度解析、分子量分佈研究等內容，具備了為客户提供專業多磺酸粘多糖結構確證技術服務的能力，歡迎垂詢！