乾貨分享 | 貼壁細胞轉染有啥招_風聞

在搞細胞實驗的時候，貼壁細胞（像是原代細胞、幹細胞、神經元這一類）在做基因轉染時常常讓人頭疼，主要是因為兩個問題：一個是轉染效率太低，另一個就是細胞容易死。為了解決這些麻煩，現在常用的辦法主要有三種：脂質體法、電轉染，還有慢病毒法。每種方法都有自己的優勢，用哪種主要看你是啥細胞、實驗時間長不長，還有你想達到啥效果。

這其中，電轉染（Electroporation）因為在處理那些“頑固型”細胞時效率特別不錯，近年來被越來越多的研究人員用得上手。今天，小編就來聊聊一套比較實用的電轉染操作經驗，手把手帶你搞定貼壁細胞的轉染難題，爭取做到轉染效率高、細胞活得也好！

一、為什麼選擇電轉染

電轉染（Electroporation）是一種藉助短暫的電脈衝在細胞膜上打孔，使外源核酸（如質粒 DNA、siRNA、mRNA 等）快速穿透細胞膜並進入胞內的高效轉染技術。相比傳統脂質體法，電穿孔對原代細胞、神經元、幹細胞等難轉染的貼壁細胞具有顯著優勢，能在提升轉染效率的同時保留較好的細胞活性，但對操作流程和參數設定的要求更高。

優勢概覽：

l 高效性：顯著提升多種核酸類型的細胞內遞送效率；

l 通用性：適配範圍廣，適用於大多數貼壁細胞類型；

l 可控性：電壓、脈衝寬度、次數等可靈活調整，優化效率與細胞生存率。

二、電轉前的充分準備

1. 細胞狀態：轉染前，確保細胞處於最佳狀態，細胞處於對數生長期，匯合度在70-90%（不同細胞系可能有差異），細胞無空泡，無污染。

2. 培養基預熱：提前將所需完全培養基加入相應孔板或培養瓶，置於 37℃、5% CO₂培養箱中預熱，以便電轉後立即接種使用。

3. 細胞消化與收集：使用温和胰酶（含 EDTA）消化，37℃孵育約 2~5 分鐘，細胞開始收縮脱落即可停止；加入預熱培養基終止消化，輕柔吹打後轉移離心管，儘量減少機械損傷。

4. 計數與活率檢測：細胞消化後細胞懸液計數活率大於80%以上（個別細胞可放低要求）。活率低的樣本可能需要優化復甦流程或調整培養時間

三、電轉實操要點

1. 控制細胞密度和DNA用量，通常100ul電轉體系使用1×10⁶個cell進行電轉，細胞密度過高或過低都會導致轉染效率降低；DNA濃度過高可能導致細胞毒性增加，降低細胞存活率，DNA濃度過低則可能導致進入細胞的DNA有限，無法達到理想的轉染率。

2. 電轉參數的選擇，查閲文獻或試劑説明書推薦參數，也可梯度測試（如電壓從低到高），電壓過高可能造成細胞膜破裂，細胞死亡，電壓過低則可能無法擊穿細胞膜或擊穿的孔洞較少，影響轉染效率。

3. 電轉後的細胞較為脆弱，應減少吹打細胞，輕柔轉移至已預熱好的培養基中，搖晃均勻，靜置培養。

四、常見問題與解決方案

在進行電轉染實驗時，常會遇到細胞死亡率較高的問題，可能是由於電壓或脈衝參數設置不合理，或者細胞本身狀態較差所致。為此，應嘗試降低電壓或縮短脈衝寬度，並確保使用健康、活躍的細胞。另一方面，若轉染效率不理想，往往與DNA濃度不足或參數設置不匹配有關。此時可以通過提高核酸濃度，並重新優化電壓和脈衝條件來改善效果。

此外，實驗重複性差也常常困擾研究人員，這通常源於操作步驟不統一或設備維護不到位。建立標準化的操作流程，並對電轉設備進行定期校準和清潔，是提高重複性的重要手段。最後，如果轉染後的目標基因表達持續時間較短，可能是未及時進行篩選或表達系統本身不穩定。建議在適當時機加入篩選因子，同時優化載體構建，以增強表達的穩定性和持久性。

在做細胞轉染的時候，如果你也遇到轉染效率低、細胞狀態不好、參數怎麼調都不理想這些問題，別擔心，你不是一個人在戰鬥！我們可以根據你的細胞類型、實驗目標和現有條件，為你量身定製轉染方案。無論是實驗怎麼設計、用什麼試劑、參數怎麼調，還是操作步驟怎麼做，我們都能給到專業建議，幫你輕鬆突破技術難點，讓實驗效率翻倍，科研進展更順利！