上海衞計委在Advanced Science發表特氟龍不粘鍋塗層殺傷精子論文_風聞

最早是一些科普類公眾號提到的，因為有完整的論文標題，

Therapeutic Repair of Sperm Quality Decline Caused by Polytetrafluoroethylene

所以可以用微軟bing搜索原始出處：

https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202505148

然後就是鼠標圈選，複製到KimiAI（https://www.kimi.com/chat/）裏，建議選1.5版本下，進行翻譯。

為了節省時間我少複製了很多內容。光結果就上萬字了，簡單劇透一下，在上海以外的地方抽檢了100多人，精子裏有多種微塑料，微塑料越多精子成活率越低，不過其他幾種塑料要混合後才能達到降低有統計學顯著性，特氟龍是隻要多了它一種就有顯著性；然後給老鼠吃特氟龍，很快弄出了精子成活率下降模型。

之後找作用靶點，有個Src集美相關磷酸化蛋白2，即SKAP2被認為是可能的靶點，用攜帶了SKAP2蛋白的外囊泡給老鼠注射可以恢復受孕率，體外對已經被PTFE弄得活力下降的精子補充SKAP2進行公孵化實驗，能改善活性，但無法修復已經導致的畸形。另外老鼠實驗中發現停止服用特氟龍微塑料顆粒一個月也不能恢復精子活性和濃度，血睾屏障的破壞是持續的，且對老鼠的性激素分泌水平也發生了負面影響等等。

總之父母那代人固執的認為吃塑料是不好的，這個直覺真對！

我前些年還以為只有全氟辛酸銨PFAS那類腎毒性分散劑，或者Gen-X全氟丙氧基二丙酸那類肝毒性分散劑直排入江河湖海產生了污染不好，現在看來我還是被廠家水軍洗腦了，呸！特氟龍這玩意它本身脱落，就有可能是微米納米級的，就有可能穿透血睾屏障（其實這實驗應該也做一些老鼠老年痴呆方面的研究，杜克大學有給老鼠吃聚苯乙烯誘發大腦斑塊的實驗，https://www.nature.com/articles/s41591-024-03453-1 證明微塑料穿透血腦屏障也不是不可能的）。

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摘要：……（省略）本研究報告了PTFE在男性泌尿生殖系統中的高檢測率（46.62%）和生物累積，並在人類和小鼠中研究了PTFE暴露對男性生育能力的影響，同時探索了潛在的治療策略。這些發現表明，PTFE暴露會延遲精原細胞和精母細胞的發育，破壞染色體聯會和DNA損傷反應，並促進精母細胞的凋亡。有趣的是，PTFE暴露特異性地靶向單倍體精子細胞中的SKAP2，導致精子細胞骨架破壞、精子形態異常和精子活力下降。令人驚訝的是，針對SKAP2的治療可以重塑精子細胞骨架和形態，並在人類和小鼠中恢復精子活力和男性生育能力。綜上所述，這些研究揭示了PTFE暴露損害精子發生機制，並強調了SKAP2靶向作為一種治療人類弱畸精子症的有前景的治療策略。……（省略）

2 結果

2.1 聚四氟乙烯暴露與人類精子質量下降相關

為了研究PTFE微塑料暴露對精子質量的影響，我們從中國四個不同省份的133名男性參與者那裏收集了精液和尿液樣本，並使用拉曼顯微鏡和熱解氣相色譜-質譜聯用（PY-GC-MS）檢測微塑料（圖1A）。值得注意的是，我們發現PTFE，這種廣泛用於不粘鍋具的有害塗層材料，與精液質量高度相關。暴露於PTFE的參與者表現出總精子數（比值比（OR）（95%置信區間（CI）），4.91（0.81, 29.57），p = 0.083）和前向運動能力（OR（95% CI），2.29（0.96, 5.49），p = 0.062）的顯著減少，分別增加了4.91倍和2.29倍的風險（圖1A）。進一步分析顯示，PTFE在46.62%的人類精漿和尿液樣本中被檢測到（62/133），表明PTFE在人體中的存在是廣泛的（表S1，支持信息）。計算機輔助精子分析（CASA）分析表明，與未暴露PTFE相比，PTFE暴露導致總精子數（p < 0.001）、前向運動能力（p < 0.05）和精子形態（p < 0.10）的減少（圖1B–D）。為了檢驗PTFE暴露對精子質量的劑量依賴效應，我們使用PY-GC-MS定量了精漿和睾丸中的PTFE濃度（表S2，支持信息）。線性迴歸分析表明精漿中PTFE濃度與精子數（p < 0.01）、前向運動能力（p < 0.001）和正常精子比例（p < 0.001）之間存在顯著的負相關（圖1E–G）。此外，在人類睾丸中，我們也觀察到隨着PTFE濃度的增加，精子質量下降（圖1H–J）。同時，人類精漿和睾丸中PTFE的生物累積效應隨着年齡的增長而加劇，加重了對男性生殖系統的持續損害（圖1K,L）。使用Diff-Quik染色和電子顯微鏡對精子樣本進行形態學分析，發現頂體脱落和頭部畸形的發生率增加（圖1M–O）。此外，在鞭毛的中部、主體和末端部分，鞭毛“9+2”微管結構受損和精子個體化異常的比例顯著增加（圖1P）。綜上所述，這些數據表明PTFE暴露可能導致精子結構異常，強調了其對男性生殖健康的潛在風險。……（省略）

2.4 PTFE暴露破壞人類和小鼠的雄性激素代謝

為了研究PTFE暴露對精子代謝的影響，我們對人類精漿和尿液進行了代謝組學分析。對照組和PTFE暴露組之間差異代謝物的分析顯示，與氨基酸生物合成相關的代謝物如庚二酸和莽草酸，以及與氧化還原反應相關的代謝物如脱氨基酪氨酸、乙酰香草醛和肌肽顯著失調（圖4A）。這些發現表明PTFE暴露可能損害蛋白質合成並誘導氧化損傷。隨後，我們分析了小鼠睾丸組織和精漿之間對照組和PTFE暴露組的差異代謝物（圖4B）。二氫睾酮作為顯著不同的代謝物出現，表明PTFE破壞了雄性激素代謝。上述四組差異代謝物的維恩分析顯示，肌肽是人類和小鼠精漿中的共同差異代謝物，二氫睾酮是小鼠睾丸和精漿中的共同差異代謝物（圖4C），表明氧化損傷和激素失衡可能有助於PTFE暴露引起的生殖損傷。

PTFE暴露破壞雄性激素代謝。A）熱圖展示了人類精漿和尿液的代謝組學特徵。數據來自人類精漿和尿液樣本（對照組，32名受試者；PTFE暴露組，37名受試者）。人類精漿數據包括對照組（56名受試者）和PTFE暴露受試者（17名受試者）。顏色表示代謝物的相對錶達量，值在漸變色塊中顯示。VIP，變量在投影中的重要性。條形長度表示代謝物對兩組之間差異的貢獻值。條形顏色表示兩組樣本之間代謝物的顯著差異（P值）。B）熱圖描繪了小鼠睾丸和精漿的代謝組學特徵（n = 3）。

顏色表示代謝物的相對錶達量，值在漸變色塊中顯示。VIP，變量在投影中的重要性。條形長度表示代謝物對兩組之間差異的貢獻值。條形顏色表示兩組樣本之間代謝物的顯著差異（P_value）。C）維恩圖顯示了來自（A,B）的四個組之間的代謝物重疊。D）對人類精漿中差異表達代謝物進行基因本體（GO）富集分析。E）對小鼠精漿中差異代謝物進行基因本體（GO）富集分析。F,G）直方圖顯示了對照組和PTFE暴露小鼠的血清睾酮（T）和二氫睾酮（DHT）水平。通過ELISA測定睾酮和DHT水平，使用450 nm的光度計光度法獲得吸光度讀數（兩者內部CV和外部CV均<10%）。數據以均值±SD表示。NS表示不顯著。p值使用Student’s t檢驗（雙側）與對照組比較計算。H,I）直方圖展示了TM3細胞中的血清睾酮（T）和二氫睾酮（DHT）水平。通過ELISA測定水平，使用450 nm的光度計光度法獲得吸光度讀數（兩者內部CV和外部CV均<10%）。數據以均值±SD表示。NS表示不顯著。p值使用Student’s t檢驗（雙側）與對照組比較計算。

進一步對這些差異代謝物進行功能富集分析表明，激素代謝是兩個物種中最顯著富集的途徑（圖4D,E）。為了驗證激素失衡，我們測量了小鼠的血清睾酮和二氫睾酮水平，並表明隨着PTFE濃度的增加，血清激素水平逐漸下降（圖4F,G）。鑑於睾丸間質細胞主要負責雄性激素的產生，我們在體外測試了TM3（一種小鼠睾丸間質細胞系）的雄性激素分泌。與對照組相比，PTFE暴露組的雄性激素分泌直接下調（圖4H,I），這與體內發現一致。總之，這些結果表明PTFE暴露破壞了睾丸間質細胞的雄性激素分泌，可能有助於男性生殖毒性。

2.5 PTFE暴露誘導生殖細胞和間質細胞的凋亡

為了檢查PTFE暴露對精子發生的影響，進行了單細胞測序（圖5A）。從對照組和PTFE暴露組的小鼠睾丸組織中總共鑑定出22個簇（圖5B），並在兩組中可視化了細胞分佈（圖5C）。細胞被註釋為六個不同的羣體（圖5D,E），基因表達模式在氣泡圖和特徵圖中顯示（圖5F；圖S4，支持信息）。細胞比例分析顯示，在PTFE暴露組中，生殖細胞的比例顯著減少，而未知細胞的比例增加（圖5G）。為了探索潛在機制，基因本體（GO）富集分析表明差異表達基因在與生殖細胞“凋亡”和“分化”相關的功能中顯著富集。在間質細胞中，與“凋亡”和“激素代謝”相關的生物過程也得到富集（圖S5A,B，支持信息）。此外，單細胞分析顯示生殖細胞、間質細胞、支持細胞和未知細胞羣體中凋亡細胞的比例顯著增加（圖S5C,D，支持信息）。此外，凋亡基因的表達，包括Bax和Caspase-3，在生殖細胞和間質細胞中顯著增加（圖S5E,F，支持信息）。體外和體內實驗表明PTFE暴露在GC-1（小鼠精原細胞系）、GC-2（小鼠精母細胞系）、TM3（小鼠間質細胞系）和SOX9陽性支持細胞中誘導凋亡（圖S5G–K，支持信息）。

對照組和PTFE暴露小鼠睾丸的單細胞轉錄組分析。A）單細胞RNA測序實驗設計的流程圖。B）UMAP（均勻流形近似投影）圖展示了對照組和PTFE暴露小鼠樣本的睾丸細胞的聚類，揭示了22個不同的生物學亞型。C）UMAP圖展示了對照組和PTFE暴露小鼠睾丸細胞的單細胞轉錄組數據的聚類分析，聚類以顏色編碼並標記。D,E）UMAP圖突出了來自對照組和80 g L−1 PTFE暴露小鼠睾丸的單細胞文庫中的七個簇。F）點圖描繪了對照組和PTFE暴露小鼠睾丸細胞中典型標記基因的表達。G）對稱條形圖展示了對照組和PTFE暴露樣本中各種細胞類型的數量和百分比，細胞計數和百分比清晰標記。向上和向下的箭頭表示細胞百分比的變化。

為了進一步表徵生殖細胞中的凋亡，將亞羣註釋為精原細胞、精母細胞、圓形精子細胞和長形精子細胞（圖S6A，支持信息）。UMAP分析揭示了對照組和PTFE暴露組中細胞的分佈（圖S6B,C，支持信息），小提琴圖（圖S6D，支持信息）和熱圖（圖S6E，支持信息）為不同細胞類型提供了基因註釋。GO富集分析顯示差異表達基因（DEGs）在精原細胞中“凋亡”異常表達，在精母細胞中“DNA雙鏈斷裂（DSB）修復”異常表達（圖S6F，支持信息）。這表明PTFE暴露主要在精原細胞和精母細胞中誘導凋亡和分化異常。偽時間分析（圖6A–C）和細胞比例分析（圖6D）進一步證明了PTFE暴露組中精原細胞和精母細胞的比例增加。此外，凋亡基因Bax在精原細胞和初級精母細胞中高表達（圖6E,F），進一步強化了凋亡在生殖細胞丟失中的作用。

有趣的是，PTFE暴露導致異常細胞羣體（簇3）的出現，與對照組相比，該簇中凋亡細胞的比例顯著增加（36.73%），而對照組為0%（圖6G）。這些發現表明PTFE暴露誘導凋亡並破壞了精原細胞和精母細胞的發育。此外，細胞週期分析顯示，與對照組相比，PTFE暴露組中處於G1期的細胞比例顯著更高（53.26%），而對照組為32.68%（圖6H,I），表明這些細胞暫時停滯。免疫熒光染色進一步證實了PTFE暴露睾丸中精原細胞和精母細胞的增加（圖S7A–D，支持信息）。此外，凋亡相關基因（Bax、Caspase-3）、增殖基因（Ki67）和細胞週期相關基因（Slx4、Vrk1）在精原細胞和精母細胞中的表達下調（圖S7E–I，支持信息）。相應地，PAS和TUNEL染色的睾丸切片表明PTFE暴露導致位於管外的生殖細胞和間質細胞的凋亡（圖S8A–E，支持信息）。為了探索PTFE影響精母細胞和間質細胞的靶點，我們的分子對接結果表明PTFE可以直接靶向Brca1、Smc5、Cyp11a1和Cyp17a1（圖S8F，支持信息），支持PTFE暴露破壞了精母細胞和間質細胞的增殖和分化平衡，並最終導致細胞凋亡。

2.6 PTFE暴露破壞雄性減數分裂過程

減數分裂是配子發生過程中的一個獨特事件，在生殖細胞的遺傳重組和基因組完整性維持中發揮着關鍵作用。[23] 為了評估PTFE暴露對減數分裂精母細胞的影響，我們進行了染色體鋪展分析以研究減數分裂過程。在對照組中，SYCP1作為聯會的標記物，定位於粗線期精母細胞的XY染色體的假常染色體區域（PAR），然而在PTFE暴露組中，觀察到粗線期精母細胞中常染色體的非聯會行為（PTFE組32.66%對比對照組8.80%）（圖S9A,B，支持信息）。此外，HORMAD蛋白（HORMAD1和HORMAD2），它們是未聯會或解聯會染色體軸的標誌物，被用來評估減數分裂的進展。在對照組的粗線期精母細胞中，約90.56%的常染色體表現出正常的聯會，然而在PTFE暴露的粗線期精母細胞中，31.79%的常染色體表現出更高的常染色體非聯會和聯會缺陷頻率（圖S9C,D，支持信息），表明PTFE暴露破壞了染色體聯會。

γH2AX的初始形成波發生在細線期，由ATM介導，發生在雙鏈斷裂（DSBs）之後，這一信號在DSBs的修復過程中逐漸消失。[24] 隨後，在偶線期出現的由ATR介導的γH2AX波與未聯會或未修復的染色體相關。[25] 在對照組和PTFE暴露的精母細胞中，在細線期和偶線期觀察到γH2AX信號，表明PTFE暴露的精母細胞中DSBs的形成相對正常（圖S9E，支持信息）。在自體染色體聯會完成的粗線期開始時，DNA損傷反應（DDR）因子如γH2AX、MDC1和pATR通常從自體染色體上消失，並在性染色體上積累，從而誘導未聯會染色質的減數分裂沉默（MSUC），稱為減數分裂性染色體失活（MSCI）。[24] 為了調查PTFE暴露的精母細胞中聯會缺陷是否與MSUC相關，我們進行了減數分裂染色體鋪展和γH2AX與SYCP3的共染色。在對照組的粗線期精母細胞中，γH2AX信號從自體染色體上消失，並在XY體上表現出典型的γH2AX定位，表明DSBs的修復已完成。相反，大多數（13.07%）PTFE暴露的粗線期精母細胞在自體染色體上顯示出持續的γH2AX信號，表明DNA損傷反應（DDR）在聯會同源染色體中仍然活躍（圖S9E,F，支持信息）。此外，PTFE暴露的精母細胞中觀察到發育遲緩，其特徵是與對照組相比，粗線期和雙線期精母細胞的比例較低，表明從粗線期到雙線期的進展延遲（圖S9F，支持信息）。

MDC1是γH2AX結合蛋白，介導γH2AX在XY體上的染色體範圍擴散。[25] 與對照組（11.74%）相比，PTFE粗線期（30.49%）中MDC1的錯位顯著更高（圖S9G,H，支持信息），暗示染色體範圍的γH2AX擴散失敗。此外，磷酸化S428 ATR（P-ATR），ATR的活性形式，未能擴散到PTFE暴露的精母細胞的XY染色質中，並保留在自體染色體上（圖S9I,J，支持信息）。綜上所述，這些發現表明PTFE暴露破壞了γH2AX從自體染色體上的正常清除，並在減數分裂期間損害了DNA損傷反應，導致聯會缺陷和減數分裂進展延遲。

2.7 PTFE靶向SKAP2損害精子發生

在精子發生過程中，單倍體精子細胞經歷一系列關鍵事件，包括頂體形成、核凝縮和鞭毛伸長，這些事件共同由一組稱為精子發生基因的基因調控。[26] 在本研究中，單細胞RNA測序顯示與細胞骨架和運動相關的基因在圓形和長形精子細胞中差異表達顯著（圖7A），表明PTFE暴露可能通過影響精子細胞骨架的形成來影響精子發生。進一步分析鑑定了兩個基因，Skap2和Ccin，它們在PTFE暴露的單倍體精子細胞中顯著下調（圖7B–E）。為了檢查PTFE暴露後成熟精子中蛋白質水平的變化，我們分析了對照組和PTFE暴露組的附睾精子的蛋白質譜。這一分析揭示了人類中有107個差異表達蛋白，小鼠中有132個（圖7F），在兩個物種中識別出56個重疊的差異蛋白。GO富集分析表明這些蛋白主要涉及精子細胞骨架、頂體形成和鞭毛運動（圖7G）。其中，SKAP2和CCIN引起了我們的關注，因為它們與精子發生相關（圖7H）。[27] 免疫熒光染色顯示，在對照組精子中，SKAP2與F-ACTIN在精子頭部下側共定位，而PTFE暴露破壞了F-ACTIN和SKAP2的正常定位（圖7I），表明F-ACTIN和SKAP2在精子中的異常定位可能涉及PTFE誘導的精子畸形。

PTFE靶向SKAP2破壞精子發生過程。A）基因本體（GO）分析表明，單倍體精子細胞（圓形STids和長形STids）簇中的差異表達基因（DEGs）分別在細胞骨架功能和精子運動方面顯著富集。B）UMAP圖可視化對照組和80 g L−1 PTFE暴露小鼠生殖細胞中Skap2的表達模式。C,D）小提琴圖展示了可變基因Skap2（C）和Ccin（D）在單倍體精子細胞簇中的表達模式。E）RT-qPCR分析表明，與對照組相比，單倍體精子細胞中Skap2和Ccin的mRNA表達水平顯著降低。數據以均值±SD表示，使用雙側Student’s t檢驗計算p值。F）維恩圖展示了人類和小鼠精子中對照組或PTFE暴露組之間差異表達蛋白的重疊。三隻小鼠接受80 g L−1 PTFE暴露，三個人類精子樣本隨機選自PTFE暴露組。G）對（F）中識別的56個重疊蛋白進行GO項分析。H）圓圈熱圖和列表顯示了人類和小鼠精子中與精子發生相關的差異表達蛋白的重疊。顏色表示相對蛋白表達。顏色條上的數字標籤表示具體的變化趨勢。I）免疫熒光染色顯示對照組和PTFE暴露精子中細胞骨架標記F-ACTIN（綠色）和SKAP2（紅色）的表達。比例

尺 = 5 µm。J）精子DNA碎片指數（SDFI）的定量分析。SDFI指的是斷裂DNA鏈的精子佔所有精子的百分比，可用於評估精子DNA的完整性。數據以均值±SD表示，使用雙側Student’s t檢驗計算p值。K）IVF後合子百分比的定量分析。數據以均值±SD表示，使用雙側Student’s t檢驗計算p值。L）PTFE分子與SKAP2蛋白的對接模型。在二維相互作用圖（左）中，範德華力和疏水相互作用用睫毛狀符號表示，氫鍵用綠色虛線表示。三維結構圖（右）顯示氫鍵為紅色虛線，範德華力為黃色虛線。M）293T細胞中的蛋白表達分析。在12.5 mg L−1 PTFE處理12小時後，評估野生型和突變型（Thr26在同源二聚體化區域的突變）293T細胞中SKAP2的表達水平。數據以均值±SD表示。使用雙側Student’s t檢驗確定統計顯著性。N）從對照組和PTFE處理（12.5 mg L−1處理12小時）組的睾丸中分離的單倍體精子細胞的蛋白表達水平。數據以均值±SD表示，使用雙側Student’s t檢驗計算p值。

為了進一步探索Skap2在精子發生和男性生育能力中的生理作用，我們通過輸出管將shRNA-Skap2注入生精小管，併產生了Skap2敲低（KD）小鼠睾丸（圖S10A，支持信息）。7天后，Skap2的mRNA和蛋白水平顯著降低（圖S10B–D，支持信息）。過碘酸-希夫（PAS）染色顯示正常小管，而CASA分析表明，與shControl組相比，shSkap2組的精子活力顯著降低，畸形精子數量增加（圖S10E–I，支持信息），這類似於PTFE誘導的異常精子發生。進一步分析顯示，在PTFE暴露和SKAP2敲低小鼠中檢測到DNA碎片率升高（圖7J；圖S10J,K，支持信息）。此外，體外IVF實驗表明，PTFE暴露和SKAP2敲低顯著降低了小鼠的受精率（圖7K）。生育能力測試表明，敲低SKAP2導致每窩平均幼崽數量減少（圖S10L，支持信息）。令人驚訝的是，觀察到SKAP2與PNA的頂體共定位，這支持了SKAP2在單倍體精子細胞中的獨特功能（圖S10M，支持信息）。

為了進一步確認PTFE直接靶向SKAP2，我們進行了先進的分子對接分析。PTFE與SKAP2蛋白之間的對接得分為–7.062 kcal mol−1，表明結合親和力強（得分低於–7 kcal mol−1通常反映強相互作用）。PTFE在SKAP2蛋白上顯示出特定的結合位點，與NH3-Lys56和NH-Phe116形成兩個氫鍵，距離分別為3.1 Å和3.0 Å。此外，觀察到PTFE與周圍殘基Arg18和Thr26之間的範德華力（圖7L）。這些發現表明PTFE與SKAP2的同源二聚體化區域內的氨基酸殘基Arg18、Thr26以及Phe116在SKAP2的PH域內結合。這種相互作用進一步得到了細胞系中體外突變實驗的支持。具體來説，Thr26的突變顯著減弱了PTFE誘導的SKAP2介導的F-肌動蛋白調節的損傷（圖7M），強調了PTFE對同源二聚體化區域的特異性。為了確定PTFE是否直接作用於單倍體精子細胞，而不是通過精原細胞或精母細胞間接作用，我們從小鼠睾丸中分離出單倍體精子細胞。在體外PTFE暴露後，這些細胞顯示出F-肌動蛋白水平顯著降低，證實了直接作用（圖7N）。綜上所述，這些結果提供了有力證據，表明PTFE通過直接靶向單倍體精子細胞中SKAP2的同源二聚體化域誘導弱畸精子症。

2.8 細胞外囊泡-SKAP2改善人類和小鼠的精子質量

細胞外囊泡（EVs）是膜包裹的結構，可以作為生物活性分子的載體，如蛋白質、脂質和遺傳物質。[28] 在本研究中，我們篩選出SKAP2是PTFE暴露在精子發生過程中誘導的關鍵下游蛋白。為了確定基於細胞外囊泡的療法是否可以拯救PTFE暴露小鼠的精子質量，我們開發了含有SKAP2的細胞外囊泡（mEVs-SKAP2），並將其注入睾丸的輸出管中，並在體外與精子共孵育（圖S11A，支持信息）。首先，我們評估了mEVs-SKAP2是否在小鼠中引發免疫反應。通過測量白細胞計數和血清IL-1β水平，我們發現將mEVs-SKAP2微注入生精小管並未引發顯著的免疫反應（圖8A,B）。這些結果支持進一步研究mEVs-SKAP2在體內的功能作用的可行性。令人驚訝的是，CASA表明，與未處理和mEVs處理組相比，mEVs-SKAP2顯著提高了精子的活力（圖8C,D；圖S11B,C，支持信息）。重要的是，與三天治療相比，七天方案取得了更好的結果，特別是在80 g L−1濃度下，總精子活力從65.14%增加到67.58%，前向運動能力從46.09%提高到49.52%（圖8C,D；圖S11D,E，支持信息）。

細胞外囊泡-SKAP2拯救PTFE誘導的小鼠精子質量下降。A）通過尾靜脈採集小鼠外周血後，使用全自動血液分析儀測量白細胞計數。數據以均值±SD表示。“NS”表示無統計學顯著差異。p值使用雙尾Student’s t檢驗計算。B）使用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）定量小鼠血清中的IL-1β水平。數據以均值±SD表示。“NS”表示無統計學顯著性。p值使用雙尾Student’s t檢驗確定。C,D）在PTFE暴露30天后，通過輸出管注射3天，使用CASA分析評估各組（未處理、mEVs和mEVs-SKAP2）的總精子活力（C）和前向運動能力（D）。數據以均值±SD表示。NS表示無顯著性。p值使用雙側Student’s t檢驗確定。E）代表性Western blot顯示在體外注射mEVs或mEVs-SKAP2後精子中的F-ACTIN蛋白丰度。GAPDH作為加載對照。F）對圖（E）中的蛋白表達水平進行定量分析。數據以均值±SD表示。p值（Student t檢驗，雙側）。G）在注射後，未處理、mEVs和mEVs-SKAP2組的異常精子比例。每隻小鼠計數100個精子。數據以均值±SD表示。p值（Student t檢驗，雙側）。

H）在注射後，未處理、mEVs和mEVs-SKAP2組的代表性差分干涉對比（DIC）圖像顯示了合子和2細胞胚胎。每組分析了9只雌性小鼠、160個受精卵和150個2細胞階段胚胎。比例尺為100 µm。黑色和白色箭頭分別表示合子和2細胞階段的未受精卵。I）如（H）所示，IVF後合子和2細胞胚胎百分比的定量分析，以均值±SD表示。p值使用雙側Student’s t檢驗計算。J）流式細胞儀分析用於評估注射後未處理、mEVs和mEVs-SKAP2組的精子DNA碎片。K）圖（J）中未處理、mEVs和mEVs-SKAP2組的DNA碎片指數的統計分析。數據以均值±SD表示。p值（Student t檢驗，雙側）。L）生育能力測試用於確定未處理、mEVs和mEVs-SKAP2組的每窩幼崽數量。在通過輸出管注射細胞外囊泡-SKAP2三天後，進行交配、陰道栓檢查和幼崽數量統計。數據以均值±SD表示，p值使用雙側Student’s t檢驗計算。

F-肌動蛋白對於精子形態和活力至關重要。因此，為了評估mEVs-SKAP2對F-ACTIN組裝的影響，我們測量並發現與未處理和mEVs組相比，PTFE暴露小鼠經mEVs-SKAP2處理後的睾丸中F-ACTIN水平增加（圖8E,F）。然而，我們並未觀察到在注射mEVs-SKAP2後，生精小管直徑和囊泡小管的顯著改善（圖S11F,G，支持信息）。值得注意的是，與體外共孵育相比，通過輸出管注射的方法在改善畸形精子方面具有更明顯的效果（圖8G；圖S11H，支持信息）。精子形態和活力可以影響受精能力。因此，進一步進行了體外受精（IVF）實驗，使用PTFE暴露小鼠的尾部附睾精子，以及從野生型（WT）雌性小鼠中收穫的卵母細胞。結果表明，與mEVs相比，mEVs-SKAP2顯著提高了體內的受精率和2細胞胚胎髮育（圖8H,I）。此外，mEVs-SKAP2顯著減少了DNA碎片，並提高了生育能力（圖8J–L）。總之，這些結果表明，mEXO-SKAP2治療可以改善聚四氟乙烯（PTFE）暴露引起的精子質量下降和受精率降低。

有趣的是，我們的研究發現mEXO-SKAP2不僅可以恢復PTFE暴露模型中的精子活力，還可以在鉛暴露模型中恢復（圖S11I和表S3，支持信息），進一步支持了mEVs-SKAP2在環境毒素誘導的弱畸精子症中的治療策略。隨後，為了評估mEVs-SKAP2的臨牀相關性，我們檢查了一組7名暴露於PTFE並被診斷為弱畸精子症的患者。在將人類精液樣本與mEVs-SKAP2共孵育後（圖9A；表S4，支持信息），精子活力顯著增加（圖9B,C）。然而，精子形態並未顯示出顯著改善，這與小鼠在mEVs-SKAP2處理後的結果一致（圖9D；圖S11H，支持信息）。從機制上講，與小鼠在mEVs-SKAP2處理後F-ACTIN增加一致，人類精子中也觀察到F-ACTIN顯著增加（圖9E,F）。由於多種不利因素導致弱畸精子症，且限制了個體對PTFE的暴露（n = 7），我們進一步在更大一組弱畸精子症患者（n = 34）中驗證了mEVs-SKAP2的治療效果（圖9G；表S4，支持信息）。

結果表明，mEVs-SKAP2也可以修復弱畸精子症個體的精子活力（圖9H,I），而精子形態並未顯示出顯著改善（圖9J）。綜上所述，這些結果表明mEXO-SKAP2調節F-ACTIN細胞骨架的形成，並對弱畸精子症具有治療潛力。

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其實這次的統計和前些年的另一次統計是一樣的結論，也是發國外期刊去了~~

【Kimi2翻譯：【樣本與流程】  • 2023.11–2024.3，在河南、山東、湖北三家生殖中心招募 113 名 24–58 歲男性（不育≥1 年）。  • 統一用 500 °C 燒過的玻璃管收集精液和尿液，-20 °C 凍存。  • 排除睾丸外傷、炎症、隱睾、精索靜脈曲張等。  【檢測 8 種塑料】  PS、PP、PC、PE、PVC、PTFE、PET、ABS  • 10–15 % KOH 40 °C 消化 48 h → 1.2 μm 玻璃纖維濾膜 → 785 nm 拉曼顯微鏡比對標準譜（匹配度 ≥80 % 算陽性）。  • 每樣本測 3 個粒子，空白對照 50 份全部陰性。   【精液指標】  按 WHO 第 5/6 版：精子濃度、總數、前向運動力、非前向運動力、正常形態。  

【統計】  單因素 + 多因素線性/邏輯迴歸，校正年齡、BMI、吸煙、飲酒、採集中心；用聚類 + 潛類別分析把人羣按精液好壞再分層，最後做風險諾莫圖。  ———  結果（Results）  【檢出率 100 %】  113 人精液和尿裏均檢出微塑料；每人 2–7 種，平均 3–5 種。  檢出率排序：PS（100 %）> PVC（91 %）> PP（89 %）> PE（77 %）> PTFE（55 %）> PET（20 %）> PC（17 %）> ABS（2 %）。 

  【PTFE 最毒】  • 暴露 vs 未暴露：  – 精子總數：188.90 ± 163.71 vs 207.67 ± 132.36 百萬（p = 0.091，邊緣）  – 精子濃度：52.13 ± 47.47 vs 58.32 ± 37.26 百萬/mL（p = 0.041）  – 前向運動力：34.11 % ± 17.02 vs 40.29 % ± 19.06（p = 0.083）  【劑量-反應】  每多一種塑料：  – 精子總數 ↓ 15.4 百萬（95 % CI: −25.6, −5.2）  – 精子濃度 ↓ 7.2 百萬/mL（−12.4, −2.0）  – 前向運動力 ↓ 8.3 %（−13.5, −3.1）   【聚類分層】  • 把 113 人按精液參數聚成“好/差”兩組： 

 – 高暴露組（≥6 種塑料）在“差組”佔 20 %，在“好組”僅 3 %（p = 0.025）。  • 潛類別分析進一步鎖定“第 IV 類”以 PTFE 為主，其精子非前向運動力最低（p = 0.007）。   【風險諾莫圖】  用尿裏塑料種類 + 年齡 + BMI 做預測模型：每多一種塑料，精子受損風險 ↑ 1.95 倍；模型 AUC 0.75，可直接當門診輔助工具。  ———  討論（Discussion）   【混合暴露更慘】  不同塑料毒理機制疊加，血睾屏障、氧化應激、炎症“三管齊下”。動物實驗亦顯示 5 mg/L 以上混合微塑料即可顯著降低睾丸係數、延遲青春期。】Association of mixed exposure to microplastics with sperm dysfunction: a multi-site study in China - eBioMedicine|https://www.thelancet.com/journals/ebiom/article/PIIS2352-3964(24)00405-5/fulltext

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順帶説一下，某些人説的，中醫怎麼證明療效，怎麼確定事故標準？目前看到的一個思路是，建立類似9體質自評量表的問卷表格，通過得分來判定陰虛、陽虛等等體質分類。然後再去作對照試驗。

【128例不孕患者對照實驗，治療組64例脱落7例剩餘61例，對照組64例完成59例，脱落5例。兩組都有五子衍宗丸，每天早晚各1次，1次9克。治療組多加雙腎俞、關元、中極四穴貼敷隔物灸。3個月後，治療組61例中女方妊娠25例（40.98%），對照組59例中女方妊娠14例（23.72%），P<0.05。】五子衍宗丸配合隔物灸法治療男性不育少弱精子症臨牀療效觀察|http://cpfd.cnki.com.cn/Article/CPFDTOTAL-ZHZY201411008103.htm

【觀察60例患者治療前後精液常規參數指標變化、精子質量及不良反應發生情況。結果治療後脾腎兩虛型弱精子不育症患者禁慾天數、精液量、精子密度、b級精子活力與治療前比較,差異無統計學意義（P＞ 0.05）;精子總活率、a級精子活力、a級+b級精子活力均較治療前明顯升高,差異有統計學意義（P＜0.05）。治療後60例脾腎兩虛型不育症患者治癒20例,顯效14例,好轉15例,無效11例,總有效率81.67%（49/60）。】五子衍宗丸加味治療60例脾腎兩虛型弱精子不育症患者的臨牀觀察 - 中國知網|https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDLAST2021&filename=SJZX202110032&uniplatform=NZKPT&v=CjInX-2NiIATuqra_01izL0zDQXbcRARbyqfebr22ECgH9do-KjFfjExMWPs3f6T

【按隨機數字表法將不孕患者分為觀察組(n=32)和對照組(n=32)。觀察組患者服用五子衍宗丸,對照組患者服用維生素C、維生素E治療。觀察兩組患者中醫症狀、精子濃度、前向運動精子率及精子正常形態率。結果治療後兩組患者中醫症狀均有改善,觀察組患者有效率為63.33%,高於對照組的26.67%,差異具有統計學意義(P<0.05)。觀察組患者治療後的精子濃度、前向運動精子率高於對照組治療後,差異具有統計學意義(P<0.05)。治療後兩組患者精子正常形態率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。】五子衍宗丸治療男性不育症64例臨牀研究|https://www.nstl.gov.cn/paper_detail.html?id=ee350e9b541396f26a22c1db53c91400

證明有效後，未來就用自評量表做體質分類輔助校準，開藥是否錯誤也可以用這個判定。當然北京中醫藥大學有紅外線攝像機體質分類，可以更精準些（但也更貴，不好普及）。

不過，所有古代人試驗出來的體質分類，對應藥物以偏糾偏改善體質從而治療不孕不育的療法，在新時代的特氟龍微塑料和其他微塑料物理性穿透血睾屏障，殺傷精子，破壞性激素分泌，降低Src激酶相關磷酸化蛋白2這些“毒害”方面，能否有效，確實不好説了。

古代人不用特氟龍不粘鍋啊。他們哪兒能想到後世的人會人工開發出抗降解性特別強的人工樹脂然後做成鍋，吃到肚子裏啊。

大漆木碗之類的東西古代用的人估計也不會特別多，要麼用瓷碗（釉下彩），要麼用便宜的陶碗吧？漆器應該也不至於做鍋去用。

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注：本文沒有推薦荷葉紋不粘鍋的意思，荷葉紋是中性的，不會天然不沾，荷葉自己有蠟才會不沾。物理不沾鍋現在普遍貴，可能會有點效果？但性價比也未必比得上自己開鍋。

只是，理論上開鍋反覆塗油反覆燒，可能形成碳化膜，導致產生多環芳香烴和初級芳香胺類致癌物，也不見得健康。古代窮人其實也未必有很多機會吃爆炒的菜？可能要宋朝（Kimi2説是明朝？）以後油料作物多了才行？因此相關健康經驗可能也不是特別多和準確。

按現在的分子毒理學研究，可能還是蒸煮燜燉的菜安全些……

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對了，法國有研究也挺反直覺的，玻璃瓶的飲料往往有更多微塑料，因為玻璃硬和塑料蓋子摩擦後的脱落顆粒物更多。所以大家也不用為了減少微塑料攝入額外花錢買玻璃瓶裝的橄欖油了：

法國研究發現玻璃瓶摩擦有塑料塗層的蓋子後，反而釋放比塑料瓶更多的微塑料；且水以外的飲料都有更多微塑料。不過，實驗中對微塑料的檢測種類似乎是有限的，有些顆粒物是無法鑑定物質，於是就有一些矛盾，像玻璃瓶裝的水只有每升3.1個不明物質，而塑料瓶裝的水有每升10.5個不明物質，這就沒進入統計。【Kimi AI概括：2.1 質量控制（QA/QC） 所有操作在特定的微塑料研究實驗室進行，以降低空氣污染和外源性微塑料的貢獻。 使用前，所有玻璃器具和濾器在高温爐中加熱至 450°C，6 小時，以消除污染。 所有溶液（包括水、70% 乙醇和 2.6% 次氯酸鈉）均經過至少 8 次過濾，確保無顆粒殘留。 操作人員佩戴丁腈手套和實驗服。 

    2.2 樣本選擇 2023 年 6 月，從當地經銷商購買樣本，涵蓋礦泉水、啤酒、葡萄酒和軟飲料（包括可樂、茶和檸檬水）。 每種飲料選擇 6 個樣本，確保來自同一生產批次。   2.3 除氣步驟 為防止碳酸飲料在過濾時濾紙降解，需先除氣。除氣過程包括：打開樣品瓶，用鋁箔覆蓋瓶口一週，然後在室温下以 100 rpm 磁力攪拌一小時。     2.4 樣本過濾 清潔所有瓶子後，用 Whatman GF/A 玻璃纖維濾器過濾樣本。過濾後，用 70% 乙醇和水沖洗容器內壁、漏斗內壁和濾器邊緣，以確保顆粒回收最大化。 2.5 觀察與識別 使用顯微鏡和傅里葉變換紅外光譜（µFT-IR）分析濾器上的顆粒，確定其性質和聚合物類型。

 2.6 蓋子污染實驗 用清潔後的玻璃瓶進行實驗，分別測試未預處    理、吹氣處理和吹氣加水沖洗處理的蓋子對微塑料污染的影響。 2.7 統計分析 結果以每升微塑料數量（MPs/L）表示，使用 Shapiro-Wilk 檢驗確定分佈的正態性，然後用 Kruskal-Wallis 檢驗分析不同組間的顯著差異。 3. 研究結果 3.1 質量控制（QA/QC） 負控和空氣控樣本中平均微塑料數量為 0.9 ± 1.4 MPs，正控回收率為 85.5% ± 7.7%。 3.2 微塑料形態 所有飲料中僅發現纖維和碎片兩種形態的微塑料。 3.3 聚合物類型 聚合物分為多個類別：聚酯類（PET 和醇酸漆）、聚烯烴類（PE、PP 等）、聚甲基丙烯酸酯類（PMMA 和 PAN）、聚酰胺類（PA 和尼龍）、苯乙烯類（PS、ABS 等）和聚氯乙烯類（PVC）。

     3.4 礦泉水 平均微塑料含量為 2.9 ± 0.7 MPs/L，玻璃瓶中含量顯著高於塑料瓶（4.5 ± 1.2 MPs/L vs. 1.6 ± 1.7 MPs/L）。 3.5 檸檬味水 兩種檸檬味水樣本中，玻璃瓶裝的微塑料含量顯著高於塑料瓶裝（15 ± 9.5 MPs/L vs. 2.3 ± 1.4 MPs/L）。 3.6 可樂 平均微塑料含量為 31.4 ± 16.0 MPs/L，玻璃瓶中含量顯著高於塑料瓶和易拉罐（103.4 ± 44.1 MPs/L vs. 2.1 ± 0.7 MPs/L 和 3.4 ± 2.1 MPs/L）。 3.7 冷茶 平均微塑料含量為 28.5 ± 13.1 MPs/L，玻璃瓶中含量顯著高於塑料瓶和易拉罐（86.3 ± 35.3 MPs/L vs. 2.2 ± 1.0 MPs/L 和 16.3 ± 3.9 MPs/L）。 

3.8 檸檬水 平均微塑料含量為 45.2 ± 21.4 MPs/L，玻璃瓶中含量顯著高於塑料瓶和易拉罐（111.6 ± 41.1 MPs/L vs. 1.5 ± 0.7 MPs/L 和 10.9 ± 4.6 MPs/L）。 3.9 啤酒 平均微塑料含量為 82.9 ± 13.9 MPs/L，小玻璃瓶中含量顯著高於大玻璃瓶和易拉罐（133.7 ± 15.9 MPs/L vs. 32.8 ± 12.2 MPs/L 和 31.8 ± 17.3 MPs/L）。     3.10 葡萄酒 平均微塑料含量為 8.2 ± 3.3 MPs/L，磚狀（利樂磚）包裝中含量顯著高於其他容器（30.0 ± 16.9 MPs/L vs.     塑料瓶2.1 ± 0.8 MPs/L、    玻璃瓶（估計是橡膠塞，人工橡膠屬於微塑料）5.3 ± 2.0 MPs/L 和 立方塑料袋3.7 ± 0.9 MPs/L）。

 ……無甜味劑可樂的微塑料含量（48.5 ± 30.6 MPs/L）顯著高於含甜味劑的可樂（14.3 ± 6.2 MPs/L。莫非存在蔗糖污染？）。礦泉水（猜測是礦物質再處理強化水）的微塑料濃度（3.7 ± 1.0 MPs/L）高於泉水（1.6 ± 0.6 MPs/L。似乎礦物質添加劑本身有污染？），差異顯著。氣泡水的微塑料含量（3.4 ± 1.0 MPs/L）略高於靜水（2.4 ± 0.9 MPs/L），但差異不顯著。    3.11 蓋子污染實驗 實驗表明，未預處理的蓋子會導致 287.3 ± 81.4 MPs/L 的微塑料污染，吹氣處理可降低至 105.8 ± 32.1 MPs/L，吹氣加水沖洗可進一步降低至 86.7 ± 42.3 MPs/L。     4. 討論 4.1 與其他研究的比較 不同研究中飲料微塑料含量差異較大，主要歸因於方法學差異、樣本類型和體積、以及研究國家的不同。 本研究中，礦泉水微塑料含量相對較低（2.9 ± 0.7 MPs/L），而可樂和啤酒的微塑料含量較高，與以往研究結果相似。 4.2 玻璃瓶污染 除葡萄酒外，玻璃瓶裝飲料的微塑料含量顯著高於塑料瓶裝飲料。 

實驗證實，玻璃瓶中的微塑料主要來自蓋子外層的油漆，預清潔蓋子可顯著降低污染水平。 5. 結論 本研究首次評估了法國銷售的飲料中微塑料的污染水平，發現玻璃瓶裝飲料的微塑料含量更高，主要來自蓋子油漆。 預清潔蓋子可顯著降低污染水平，但無法完全消除微塑料。 由於缺乏毒理學數據，目前無法確定飲用這些飲料是否會產生健康風險。    】Microplastic contaminations in a set of beverages sold in France|https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0889157525005344

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以前有美國科學家悲觀的預測按現在的精子成活率下降速度線性推演，2045年人類精子成活率中位數是0。

https://news.qq.com/rain/a/20210331A0AR2H00

也有科學家反駁發展中國家並沒有那麼快的下降。現在看來前者的悲觀不是毫無道理。估計到時候是有錢做得起SKAP2蛋白再注入治療或者試管嬰兒的人能生育？當然這個時間點也許沒這麼快，也許是2050或2060年才會這樣？

法國那個論文其實變相證明農作物普遍也有微塑料污染，所以比水複雜的飲料，微塑料就容易更多。